酶底物法檢測大腸菌群是近年來新興的一種方法，其相較于傳統的多管發酵法、濾膜法等操作更加簡單、檢測快捷有效。目前該方法也是全球都在廣泛使用的方法，在2018年該方法也被納入國標。今天，我們就和大家一起來說說酶底物法檢測大腸菌群的具體步驟，希望對大家有所幫助。
一、酶底物法檢測大腸菌群操作方法
1、工作原理
酶底物法檢測大腸菌群是在特定溫度下培養特定的時間，糞大腸菌群能產生酶底物法采用大腸菌群能產生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)的細菌群組，其能分解色原底物釋放出色原體，使培養基呈顏色變化，以此來檢測水中的大腸菌群。
2、實驗室用水
實驗室用水為無菌水，取來適量的純凈水，放在燒杯中，經過121攝氏度，高壓蒸汽滅菌，需要20分鐘。
3、采樣瓶的清洗準備
(1)是新購買的500ml具旋帽或者是磨口塞得廣口玻璃瓶,應在百分之二的鹽酸中浸泡幾個小時,還需要用自來水沖洗干凈,再用純凈水清洗1-2次,控干,備用。
(2)將清洗干凈干燥的采樣器,用專用的紙包裹起來,放入恒溫干燥箱內,將溫度設置到121攝氏度,滅菌20分鐘,烘干。滅菌完成后,還需要關閉實驗室電源待溫度降到50攝氏度以下時,方可開門取樣品瓶,不然,玻璃瓶會因為操作不當爆裂。
4、儀器和試劑
儀器：培養箱(36±1℃)、高壓蒸汽滅菌器、定量盤(51孔和97孔)、
程控定量封口機、試管、稀釋瓶、移液管、量筒。
試劑：立科Colitech酶底物法檢測試劑，滅菌稀釋水。
5、酶底物法檢測操作步驟
1)水樣稀釋
檢測實驗所需水樣為100ml，若水樣污染嚴重可進行稀釋(取10ml水樣加入到90ml的滅菌稀釋水中，必要時可加大稀釋度)。本實驗取20個水樣分別進行總大腸菌群(1-10號)和糞大腸菌群(11-20號)的檢測。
大腸菌群水樣取樣瓶
2)定性試驗
用100ml的無菌稀釋瓶量取100ml水樣，加入專用培養基，搖晃至溶解，以36±1℃的溫度在培養箱培養24小時。
3)定量試驗
用100ml的無菌稀釋瓶量取100ml水樣，加入專用培養基，搖晃至溶解，將該溶液導入51孔(總大腸菌群)和97孔(糞大腸菌群)的定量盤內，然后將定量盤放入立科程控定量封口機封口，以36±1℃的溫度在培養箱培養24小時。
4、結果判定
檢測結果對比
1)定性反應
對水樣培養24小時后進行結果判定，如顏色變成黃色，則判定為陽性，表示水中含有大腸菌群，若水樣未發生顏色變化，則判定為陰性，表示水樣中不含大腸菌群。定性結果以大腸菌群檢出或未檢出作報告。
2)定量反應
對培養24小時后定量盤內的水樣進行結果判定，若孔穴內的水樣有黃色反應則表示該孔板中含有大腸菌群，總大腸菌群對照51孔定量盤MPN表，糞大腸菌群對照97孔定量盤MPN表，結果以MPN/L報告。若所有孔穴均未產生黃色反應，以未檢出作報告。
以上就是關于酶底物法檢測大腸菌群的方法及詳細步驟。立科酶底物法檢測儀器操作簡便，數據準確，二次污染小，無需再無菌室內操作，滿足GB5749-2006生活飲用水標準和GB8978-1996污水綜合排放標準，適用于源水、瓶裝水、飲用水、畜牧用水、廢水、再生水、食品水、醫療用水等各類水樣，目前已在國內廣泛應用。
