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科普知識
酶底物法檢測系統檢測糞大腸菌群時應注意哪些
添加時間:2022-11-15
    隨著國家對環境問題的日益重視,越來越多的檢測設備和技術應用于水質檢測中。其酶底物法檢測糞大腸菌群以操作簡便、檢測時間短、結果可靠而被廣泛應用。那么,我們在使用酶底物法檢測時應注意哪些問題?下面我們一起看看。


  采用酶底物法檢測水中糞大腸菌群是將已加入培養基的水樣混勻與97孔定量盤,置于44.5±0.5℃培養24h,糞大腸菌能在該溫度產生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase),分解選擇性培養基中的鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖(ONPG)生成黃色的鄰硝基苯酚,通過定量盤大小孔顯黃色數查詢酶底物法的MPN表,計算出糞大腸菌群的濃度。
  那么,我們在操作的過程中需要特別注意以下幾點:
 
  1、樣品稀釋的合理性
  通過實驗發現,采用酶底物法檢測糞大腸菌群,水樣稀釋倍數越高,其測定的數值就越低,所以我們在日常檢測工作中,應該根據具體的情況對水樣進行逐一做小倍數的稀釋,這樣即可以確保檢測結果的準確度,又可以提高數據的真實性。
 
  2、樣品的均勻性
  我們在每次取原液時,取樣的均勻度也會直接影響到后面的稀釋結果,所以說在每次取樣前需要充分搖勻,并盡快與培養基混合,否則會出現結果差異性很大,并且失去了該方法的穩定性。

  3、溫度培養的恒定性
  使用酶底物法檢測糞大腸菌群時,培養溫度要按照要求設定,樣品在培養箱中于44.5℃培養,誤差控制在±0.5℃,溫度偏低或偏高都會直接影響到檢測結果。
 
  4、培養時間的重要性
  培養時間的長短也是會影響到檢測結果的準確性,我們通過大量實驗對比,發現使用酶底物法檢測糞大腸菌群培養16~24h的檢測結果與24h相比均有這明顯的差異,而培養22~28h與24h結果差異不顯著。因此,使用酶底物法檢測總大腸菌群的培養時間應該在22~28h之間是可以得到準確的結果。
 
  5、其他注意點
  (1)在使用該儀器時需要配合使用51孔/97孔定量檢測盤;
  (2)檢測樣品/試劑混合液需要分配到獨立的孔中;
  (3)51孔定量盤可檢測每100mL水樣中1-200MPN值。
  (4)97孔定量盤可檢測每100mL水樣中1-2,419MPN值。
  (5)整個檢測過程手工操作時間小于1分鐘。

 
  綜上所述,我們在使用酶底物法檢測儀器時處理遵循以上幾點要求外,還要嚴格按照產品使用說明進行操作,不可以隨意更改流程或培養溫度,以免檢測結果產生誤差。立科酶底物法檢測儀器操作方便、檢測速度快、準確度高,也將在未來取代多管發酵法、濾膜法等傳統檢測方法。

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