酶底物法測定總大腸菌群的影響因素
酶底物法測定總大腸菌群的影響因素
概念
總大腸菌群是一類需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，37℃條件下培養在48 h內發酵乳糖產酸產氣。大腸菌群又系指一群能發酵乳糖、產酸或醛，并產生β－半乳糖苷酶需氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，主要包括埃希氏菌屬、檸檬酸菌屬、腸桿菌屬及克雷伯氏菌屬四種。大腸埃希氏菌又稱大腸桿菌或普通大腸桿菌，它是人和混血動物腸道中的正常寄生細菌，作為糞便污染的指示菌。
大腸菌群是腸道中最普遍、數量最多的一類細菌，具有較強的抗逆性，而且在水中的數量與腸道致病菌呈一定的相關性，是目前國際上判斷一個水體的污染程度和衛生質量等方面重要的生物學指標。
方法
傳統的測定方法主要有多管發酵法、濾膜法和酶底物法三種，多管發酵法需經過發酵－培養－復發酵，操作復雜、費時，濾膜法檢出后也需要復發酵及革蘭氏染色驗證，酶底物法檢測總大腸菌群操作簡便，檢測時間短，結果可靠，無需確認試驗，且可以同時檢測水中大腸埃希氏菌的污染狀況，能夠較精確地判斷水樣的微生物污染狀況.
酶底物法的影響因素：
1.環境因素的影響
對同一水樣在自然環境下與無菌室中分別進行總大腸菌群和大腸埃希氏菌檢測，培養時間為24 h，培養溫度為(36±1)℃，水樣在自然環境下與無菌室內總大腸菌群和大腸埃希氏菌的檢測值相對偏差在10%以內，樣品T檢驗分析p＞0．05，監測值差異不顯著，表明此方法對實驗環境是否無菌沒有嚴格的要求。
2.培養溫度
總大腸菌群和大腸埃希氏菌的檢測培養溫度需嚴格控制在35～37℃，培養溫度過高或過低均使檢測結果不準確。
3.培養時間
總大腸菌群培養16～20 h的檢測結果與24 h相比均有顯著性差異(p＜0.05)，培養22、28與24 h結果差異不顯著(p＞0.05)；而大腸埃希氏菌培養16～22 h的檢測結果與24 h相比均有顯著性差異(p＜0.05)，培養28 h與24 h結果無顯著性差異(p＞0.05)。
此方法對總大腸菌群的檢測培養時間在22～28h之間可以得到準確結果，而大腸埃希氏菌的檢測則需24～28h；無論振蕩培養或者靜置培養對培養結果基本沒有影響。
4.培養方式
處理完的水樣倒入51孔板中，在盡量去除氣泡的情況下，將兩平行板分別在靜置和振蕩兩種條件下培養24 h，配對樣品T檢驗分析兩種方式下檢測結果無顯著性差異(p＞0.05)，說明振蕩或靜置的培養方式對檢測結果影響不大。
結論：
①酶底物法檢測總大腸菌群和大腸埃希氏菌不受實驗環境是否無菌的影響。
②此方法對總大腸菌群和大腸埃希氏菌的檢測培養溫度需嚴格控制在35～37℃間，溫度過高或者過低都會影響檢測結果。
③此方法對總大腸菌群的檢測培養時間在22～28 h之間可以得到準確結果，而大腸埃希氏菌的檢測則需24～28 h;
④無論振蕩培養或者靜置培養對培養結果基本沒有影響。
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