科普知識
摘要：提出水中菌落總數酶底物檢測方法，通過實驗室間比對、實際水樣檢測，比較酶底物法與平皿計數法用于水中菌落總數的檢測結果。實驗結果表明該兩種檢測方法用于水中菌落總數檢測的結果具有一致性，無統計學意義的差別。酶底物法可以用作評價水質微生物污染的標準依據。
我國對生活飲用水、水源水、地表水等進行衛生學評價時，菌落總數(Totalcoliforms)是判定水質被細菌污染程度的重要指標之一。菌落總數的測定方法有國家標準測定方法和快速測定方法。平皿計數法是目前水中菌落總數的標準檢測方法，其應用研究較多，如錢冬梅應用平皿計數法測定了生活飲用水的菌落總數，這種方法設備簡單，試驗步驟較為繁瑣，對操作人員專業水平要求較高，不利于應急檢測，和對水的衛生學狀況做出快速評價。采用測試片法對自來水、游泳水等水質以及食品中的菌落總數進行了測定，并與傾注培養法進行了對比，結果顯示兩方法無差異，可應用于日常衛生檢測工作。酶底物法(立科)檢測水中菌落總數具有操作方便、準備簡單、快速；干預性少、讀數范圍寬、結果容易判斷等特點，適用于水中菌落總數快速檢測。
本文采用酶底物法對水中菌落總數進行快速檢測，該方法操作簡單，結果判讀容易、準確，無需稀釋即可檢測738個／1mL水樣，不僅適用于水源水、飲用水的檢測，還適用于應急檢測和污水檢測，易于推廣，可以較好的彌補傳統方法的不足。
1實驗部分
1．1原理
復合酶技術培養基一立科檢測菌落總數培養基采用立科酶底物技術)。該試劑包含多種獨特的酶物質，每一種都針對不同的細菌酶設計，且已包含普遍的介水傳播的細菌，所有的酶底物在被分解時均產生相同的信號。水中存在的細菌能夠分解一種或者多種酶基質然后產生一個信號，在檢測菌落總數時，這個信號即為365nm紫外4O城鎮供水NO．22013燈下的熒光。
1．2材料與試劑
立科定量盤；lmL移液管或移液槍；10mL移液管或移液槍；培養箱(35±1)；6瓦366FIITI紫外燈；
紫外燈箱(23cmx30onx17on1)；無菌水。colitech培養基由西安立科環保科技有限公司提供；菌落總數標準試劑為美國ERA盲樣標準。
l_3方法步驟
1．3．1先向100mL裝有固體培養基的瓶中加入無菌水至刻度，搖勻，制成液體培養基。該液體培養基應放置在冰箱中保存(℃左右)，使用有效期為5d。見圖1。
1．3．2取1mL水樣及9mL液體培養基倒入立科定量盤中。見圖2。
1．3_3將定量盤蓋好，在水平桌面上旋動將所有水樣分配到定量盤的孔中(孔中的氣泡不會影響結果)。
見圖3。
1．3．4將定量盤豎起(90。)，將多余的水樣由盤內海綿吸收。見圖4。
1．3．5將定量盤緩慢翻轉過來，于培養箱中(35±0．5)培養48h(若結果為可疑陽性可延長培養時間至72h)。見圖5。
1．3．6計數：培養完成后將培養盤蓋打開，用紫外燈在定量盤上方13on處照射，數顯熒光的孔數。對照MPN表(見附表)得出結果。注意：海綿條顯熒光不必記錄在讀數范圍內。由于本方法的大檢測上限為738MPN／mL，如需稀釋時，將結果乘以稀釋倍數即為報告讀數(如稀釋l0倍時的操作為：加入0．1mL樣品和9．9mL液體培養基)
2.結果與分析
2.1盲樣比對實驗--T檢驗分析
選取北京、上海、溫州3家水質檢測實驗室對比同一盲樣（標準試劑）進行酶底物法和平皿計數法比對試驗，具體試驗結果如圖6
對比以上酶底物法和平皿計數法檢出共160個結果進行配對T檢驗，兩種方法的配對T檢驗結果如下表1.
表1。
表1給出配比變量差值的T檢驗結果，Mean均值之間的差值為-1.78750；Std.Deviation差值的標準差16.10385；Std.ErrorMean差值的調準誤為1.80047；95%ConfidenceIntervaloftheDifference置信區間上下限為-5.37124和1.79624；t-valuet值為-0.993；df自由度為79；Sig（2-tailed)雙尾T檢驗的結果，獲得t值的概率P值為0.324，檢驗結果表明酶底物法和平皿計數法檢測結果沒有統計學意義上的差別（P＜0.50）。
2.2水樣檢測--線性回歸分析
采集地表水水樣進行檢測，為方便試驗結果的有效性和方便統計，要求檢測高、低濃度兩個水樣，同時，要求低濃度水樣的MPN值控制在50MPN/ml左右，高濃度水樣的MPN值控制在100MPN/ml左右。由省內6個地區（中山、珠海、佛山、順德、番禹、南海）和省外3個地區（北京、上海、溫州）進行試驗，試驗結果如圖7
對以上9家實驗室用酶底物法和平皿計數法共1160個檢測結果進行線性回歸統計分析，兩種方法線性回歸分析見下表2。
由表2知，標準化回歸系數Beta為0.95，表明兩組數據相關性較好，兩種方法的檢測結果具有可比性。檢驗結果P=0.00，均小于0.05，表明兩種方法在檢測菌落總數時沒有顯著差異性，具有等效性。此結果說明酶底物法的測定結果準確、可靠，可以替代平皿技術發作為水中菌落總數的測定方法。
結語
國際中菌落總數“平皿計數法”的檢測方法自1985年一直沿用至今，該方法因成本低而被廣大實驗室所接受，但已經不能滿足現代的實驗室的檢測需求。酶底物法則完全彌補了平皿計數法的不足，而且其檢測結果與平皿計數法無法統計學意義的差別。
