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　　酶底物法（Defined Substrate Technology,DST）是指在選擇性培養基上能產生β-半乳糖苷酶，（β-D-galactosidase）的細菌群組能分解色原底物釋放出色原體是培養基呈顏色變化，以此技術來檢測水中大腸菌群的方法。該方法在全球廣泛的被使用在檢測水中糞大腸桿菌及總大腸菌群。
立科固定沒酶底物法產品經過多年研發，全球使用廣泛的測試方法，中華人名共和國國家標準檢測方法，被國內多家供水公司、疾病預防控制中心、環境檢測中心及水文站全面使用。
本文采用立科酶底物法檢測大腸菌群，結果表明該方法的特異性強，時間周期短，數據準確，
二次污染小、簡便快速，適用推廣應用。
1、立科酶底物法簡介
Colitech酶底物法試劑采用GB/T5750.12-2006中固定底物技術（Defined Subsrate Technology,DST）的Minimal Medium ONPG-MUG(MMO-MUG)培養基，當Colitech酶底物法檢測試劑加入含有總大腸菌群細菌組的水樣，目標細菌在含有固定底物ONPG-MUG的培養基中繁殖，大腸菌群細菌組產生的特異性生物酶β-半乳糖苷酶能分解Minimal Medium ONPG-MUG培養基中的固定色原底物ONPG，使培養基呈現黃色反應，同時水樣中大腸埃希氏菌產生特異性B-葡萄糖苷酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培養基中的固定熒光底物MUG，產生特征性藍色熒光。因而可以定性檢測水中大腸菌群和大腸埃希氏菌。當水樣中少數非目標細菌的生物酶試圖和OPNG或MUG，產生特征性藍色熒光。
因而可以定性檢測水中大腸菌群和大腸埃希氏菌。當水樣中少數非目標細菌的生物酶試圖和
ONPG或MUG反應，干擾檢測結果時，colitech培養基中特殊配方的基質會抑制其反應過程，控制假陽性的產生；同時，這些特殊培養基質可以有效促使目標細菌的生物酶和固定底物反應，所以假陰性發生率比傳統方法更低。Colitech酶底物法檢測試劑為符合《生活飲用水標準檢測方法》的培養基。Colitech和51或97孔定量檢測盤聯合使用，可以定量檢測100毫升水樣中0~200個或0~2419個目標細菌，而不要稀釋。
 
2、酶底物法儀器與試劑
儀器
培養箱（36±1℃），高壓蒸汽滅菌器，定量盤（51孔和91孔），程控定量封口機，試管，稀釋瓶，移液管，量筒。
試劑
立科colitech酶底物法檢測試劑，滅菌稀釋水。
 
3、酶底物法檢測步驟
3.1水樣稀釋
檢測所需水樣為100ml。若水樣污染嚴重時可進行稀釋，取10ml水樣加入到90ml滅菌稀釋水中，必要時要加大稀釋度。本實驗室取20個水樣分別進行總大腸菌群（1-10）和糞大腸菌群（11-20）檢測。
3.2定性試驗
用100ml的無菌稀釋瓶量取100ml水樣，加入立科培養基，搖晃至溶解，36±1℃培養24小時。
3.3定量試驗
用100ml的無菌稀釋瓶量取100ml水樣，加入立科培養基，搖床至溶解，將該溶液導入51孔（總大腸菌群）或97孔（糞大腸菌群）定量盤內，將定量盤放入程控定量封口機封口，36±1℃培養24小時。
結果報告
定性反應
將水樣培養24h后進行結果判讀，如顏色變成黃色，判斷為陽性反應，表示水中含有大腸菌群，若水樣未發生顏色變化，判斷為陰性反應，表示水樣中不含大腸菌群。定性結果以大腸菌群檢出貨未檢出報告。結果見表1。

表1定性反應結果
水樣編號	反應結果	水樣編號	水源水樣
1	＋	11	＋
2	＋	12	＋
3	－	13	＋
4	－	14	－
5	＋	15	＋
6	－	16	＋
7	－	17	－
8	＋	18	＋
9	＋	19	＋
10	＋	20	＋

 
定量反應
將培養24h的定量盤內水樣進行結果判讀，如果孔穴內的水樣變成黃色則表示該孔穴中含有大腸菌群，幾乎有黃色反應的孔穴數，總大腸菌群對照51孔定量盤法不同陽性結果的可能數（MPN）及95%可信范圍表，糞大腸菌群對照97孔定量盤法不同陽性結果的MPN值查出其代表的大腸菌群可能數（MPN），結果以MPN/L報告，如果所有孔均未產生黃色，以未檢出報告。結果見表2.3。

表2總大腸菌群定量反應結果（51孔）
水樣編號	陽性孔數	MPN/L
1	6	64
2	15	178
3	0	＜10
4	0	＜10
5	3	21
6	0	＜10
7	0	＜10
8	1	10
9	22	288
10	16	192

 

表3糞大腸菌群定量反應結果（97孔）
水樣編號	陽性孔數（大孔）	陽性孔數（小孔）	稀釋倍數	MPN/L
1	38	21	100	1.17×103
2	25	16	100	5.73×104
3	19	14	50	8.32×103
4	0	0	-	＜10
5	36	20	1000	1.03×105
6	19	2	1000	2.43×105
7	0	0	-	＜10
8	49	26	1000	4.88×106
9	48	28	10000	3.97×107
10	42	25	-	1.64×103

 
結語
本實驗采用酶底物法檢測水樣中大腸菌群，無需制備培養基，只需獨立包裝立科培養基溶解后，即可使用。檢測每個樣品只需簡單5步即可，操作簡單，快捷，實際手工操作的時間只需兩分鐘，無需在無菌室內操作，結果準確減少假陽性反應與假陰性反應，判讀容易，滿足GB5749-2006生活飲用水標準和GB8978-1996污水綜合排放標準。可應用于源水，瓶裝水，飲用水，畜牧用水，廢水，再生水，食品水，醫療用水等各樣水樣，可以很好的用于突發事件應急。