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　　摘要：使用酶底物法和多管發酵法檢測水質中的糞大腸菌群，結果表明，兩種方法在統計學上并無顯著差異。酶底物法具有操作快速簡便的優點，檢測靈敏度也高于多管發酵法。酶底物法可以采用成品的培養基及試劑，操作方便，無需確認驗證，20h即可判斷水樣中糞大腸菌群的MPN值，實驗環境是否無菌對酶底物法測定水中糞大腸菌群的影響不大，但是培養溫度對結果影響較大。
糞大腸菌群主要來糞便，它在44-44.5℃的高溫條件下仍可生長繁殖并發酵乳糖產酸產氣，其他特性均與總大腸菌群相同。因此，可用提高培養溫度的方法造成不利于自然環境的大腸菌群生長的條件，使培養出來的菌主要為來自糞便中的大腸菌群，從而更準確地反映水質受糞便污染的情況。糞大腸菌群細菌在衛生學上具有重要的意義。
目前水中糞大腸桿菌群（耐熱大腸菌群）的檢測方法主要有傳統的多管發酵法和濾膜法，并且已經列入環保行業標準方法，此兩種傳統方法被國內環境檢測部門廣泛采用。傳統方法實驗操作需要較多的試劑盒器材，步驟繁瑣，檢驗周期較長，培養基保存時間短，陽性結果需驗證試驗，對實驗室環境的無菌程度要求也比較高，不能對誰的溫升學狀況作出快速的評價，制約了其應用。
固定底酶底物法利用大腸菌群細菌能產生β-半乳糖苷酶（β-D galactopyranoside）使培養液呈黃色，來判斷水樣中是否含有大腸菌群、糞大腸菌群（耐熱大腸菌群）。目前被美國、歐洲及大部分亞洲國家廣泛應用于水中總大腸桿菌，糞大腸菌群（耐熱大腸菌群）及大腸埃希氏菌的檢測，并通過美國RPA、《水與廢水標準檢測方法》認證。
本文通過比對試驗，證實了酶底物法和多管發酵法在統計學結果上無顯著差異，并對影響酶底物法實驗進行了研究。
1.實驗部分
材料與試劑
乳糖蛋白胨和EC肉湯培養基；高溫壓力滅菌器；3mm接種環；立科試劑；標準菌株大腸埃希氏菌，MPN值/100mL標準值341/100mL，可接受范圍34~703/100mL無菌取樣瓶（里面裝有1.5%硫代硫酸鈉去除水樣中的余氯）；97孔定量盤；封口機（帶97孔定量盤橡膠拖墊）；97孔陽標準比色盤；培養箱。
1.2樣品來源
巢湖入湖口水源水，某污水處理廠出水，某固廢處理廠出水。
1.3實驗方法
1.3.1多管發酵法
參考《GB/T5750. 12-2006 生活飲用水標準檢驗方法》和《HJ/T 347-2007 水質糞大腸菌群的測定多管發酵法和濾膜法》具體操作步驟見表1.
酶底物法
具體操作方法詳見表1.

	多管發酵法	酶底物法
培養時間	48h	24h
準備物品	乳糖蛋白胨培養基，EC培養基、試管、移液管、接種棒、以及其他常規實驗室儀器	立科試劑，定量盤，封口機
實驗室環境	實驗環境 培養基和器材均需滅菌 ，操作應在無菌室或無菌操作臺進行	試劑和器材都是無菌的成品，操作可在非無菌環境中進行
操作步驟	初發酵：將待測試水樣用3個不同水樣量接種，每個水樣量要有5個管。其中，如接種體積為10mL或少于1mL，則可接種于普通濃度的乳糖蛋白胨培養液中。 培養：接種后的水樣置于37±0.5℃培養24h 復發酵：初發酵陽性結果的發酵管，用接種棒將培養物轉接到EC培養液中，于44.5±0.5℃培養24h	于100mL水樣中加入一份立科試劑，充分混勻，混合后倒入水樣在定量盤中用配套封口裝置封裝，于44.5±0.5℃培養24h
操作時長	長	短
低檢出個數	2個/100ml	1個/100ml

2 結果
2.1 實驗數據的可行度評價
采用大腸菌群質控樣品大腸埃希氏菌來自國家標準菌庫，用無菌水稀釋到一定倍數，分別用酶底物法和多管發酵法培養，查MPN表得出結果。如表2所示，兩種方法的測定結果均在質控范圍內，經配對t檢驗分析，兩者差異無統計學意義，t=0.63,p＞0.05。

兩種方法的比對分析
采用多管發酵法和酶底物法同時測定巢湖入口湖口。
表1 多管發酵法、酶底物法測定水中糞大腸菌群方法的比較
實驗環境對酶底物法分析結果的影響
在同一個點位采樣8份，用酶底物法分別在無菌操作間、非無菌實驗室、室外環境中進行檢測，分析結果如圖3所示。將非無菌室和室外檢測的結果分別與無菌室中檢測的結果進行配對t檢驗分析，t值分別為0.57和0.91，p＞0.05.因此，酶底物法與實驗環境是否無菌關系不大。
培養溫度對酶底物法分析結果的影響
在8個不同的點位采集水樣，用酶底物法在40-49℃進行培養，結果如表3.將44℃和45℃兩組數據無顯著性差異。但是40℃、42℃、47℃和49℃的培養結果與44℃相比，均有顯著性差異（p＜0.05）。
糞大腸菌群的培養溫度為44.5±0.5℃。如果培養溫度過低，除了糞大腸菌群之外的其他大腸菌群會有部分繼續生長，從而導致結果偏高。而培養溫度過高，糞大腸菌群會停止生長，導致結果偏低。因此，酶底物法分析大腸菌群需嚴格控制培養溫度。