酶底物法快速測定地表水中糞大腸菌群的研究
摘要:采用酶底物法對一地表水水樣進行不同倍數的稀釋后進行培養檢測，并觀察結果變化。結果表明，地表水水樣稀釋倍數越小，檢測結果越準確.采用酶底物法測定地表水中的糞大腸菌群具有快速、簡便的特點，但測定水樣稀釋的倍數對其測定結果有一定的影響。
地表水中糞大腸菌群是評價水質受糞便污染程度的重要指標之一，傳統檢測方法是采用多管發酵法或者濾膜法。但這兩種方法檢測時間相對較長(48h左右)，且需要進行驗證實驗，實驗步驟較為繁瑣，所以多管發酵法或者濾膜法不能對水質狀況做出快速評價。因此，探索快速簡便的檢測方法顯得十分必要。固定底物技術酶底物法可以較好地彌補傳統方法的不足。根據《生活飲用水國家衛生標準》(GB/T5750.12—20061)中推薦的固定底物技術酶底物法，利用西安立科環保科技有限公司立科
酶底物試劑，檢測100mL水樣，只需手工操作1min，無需無菌實驗室，即可在24h內定量檢測出水中的糞大腸菌群數。該方法極大地減少了工作量，避免了使用多管法時逐級稀釋帶來的操作誤差，也避免了使用濾膜法時肉眼讀數的人為誤差。
一、實驗部分
實驗材料
立科試劑;100mL無菌取樣瓶(里面裝有1.5%的硫代硫酸鈉，用于去除水樣中的余氯);無菌培養定量盤(5l孔);立科智能
程控定量封口機(帶5l孔定量盤橡膠托墊);51孔陽性標準比色盤;便攜式培養箱。
二、實驗方法
在培養溫度為44.5±I℃條件下，糞大腸菌群細菌能特異性地產生β—半乳糖苷酶（β—D—galactosidase)，該生物酶可以分解ONPG(Ortho—nitrophenyl—β—D—Ralactopyranoside，β—半乳糖醛苷)，使培養液呈黃色。
實驗步驟如下:
1)采用100mL無菌取樣瓶取100mL混勻水樣r如果水樣糞大腸菌群數大于2005個/L，則酌情少取，并用新配置的超純水稀釋至100mL刻度線）；
2)在裝有水樣的取樣瓶中加立科試劑，充分搖勻，使試劑完全溶解;
3)把溶解完全的水樣倒入無菌培養定量盤(51孔）;
4)采用帶51孔定量盤橡膠托墊在封lZl機上進行封裝:
5)把封裝好的5l孔定量盤放入44.5±1℃恒溫培養箱中培養24h;
6)培養24h后，從培養箱中取出，與5l孔陽性標準比色盤進行比較（黃色孔顏色比51孔陽性標準比色盤深的表明為陽性反應)，根據51孔定量盤上的陽性孔數，對照立科公司提供的MPN表，報出結果。
三、統計學分析
數據的整理統計使用execl軟件進行。
四、結果與討論
對同一地表水樣進行l~200倍不等的稀釋時，測定結果范圍在4000個/L-8260個/L之間，偏差較大。
測定結果如表l及圖l所示。
由表1和圖1可以看出，水樣不稀釋或者稀釋兩倍時，51孔定量盤的陽性孔數為51孔，表明該水樣的糞大腸菌群濃度大于2005個/L；對水樣進行4倍或5倍的稀釋培養檢測時，51孔定量盤的陽性孔數分別為50孔和49孔，測定結果值為8020個/L和8260個/L，兩者的平均偏差為1.5%。該結果與傳統的多管發酵法的實驗結果具有較好的一致性，結果可信。而對該水樣進行10-200倍不等得稀釋時。檢測結果值在7820個/L-4000個/L之間，結果均偏低。由此可知，稀釋倍數越高，測定結果值就越偏低。因此，在日常檢測工作中，檢測人員應根據具體情況對水樣進行小倍數的稀釋。
五、結語
酶底物法測定水樣中的糞大腸菌群具有快速、簡便、準確的特點。無需清洗玻璃器皿，無需無菌室，無需配置培養基，24h出結果，能夠較為準確地判斷水樣的污染狀況。但測定水樣的稀釋倍數對其測定結果有一定的影響，檢測人員應根據具體情況對水樣進行小倍數的稀釋，使結果更加準確真實。
沒安裝暢言模塊
